Энн-Мэри Дафф родилась 8 октября 1970 года в Лондоне в Великобритании. Ее родители – ирландцы, отец работал художником–декоратором, а мать – в обувном магазине. У неё есть старший брат Эдди.
Будучи ребенком, Дафф была очень стеснительной, и, чтобы справиться со своей застенчивостью, девочка начала заниматься в молодежном театре Young Argosy. Именно это увлечение в итоге стало основой ее интереса к сцене. В подростковом возрасте Дафф решила подать документы в театральную школу, и хотя ей не удалось поступить с первого раза, в 19 лет ей все-таки удалось начать обучение в Центре драмы в Лондоне.
С 1994 года актриса стала профессионально играть в театре. Она участвовала во многих театральных постановках и исполнила яркие роли Жанны Д’Арк в Королевском национальном театре, Альмы Раттенбери в театре Олд-Вик и многие другие. Своим мастерством актриса завоевала любовь и уважение как театральных критиков, так и зрителей.
В кино актриса стала сниматься гораздо позже. Популярность ей принесли съемки в оригинальных британских «Бесстыдниках», где она сыграла Фиону, а также роль королевы Елизаветы в мини-сериале телеканала BBC «Королева-девственница».
Со своим будущем мужем, актером Джеймсом МакЭвоем, она познакомилась на съемках сериала «Бесстыдники», в 2006 году они поженились. Но через десять лет пара объявила о расставании. У них есть сын Брэндан.
После развода актриса сконцентрировалась на работе в театре, но также продолжает активно сниматься в кино и на телевидении.
